โรงเรียนวัดกงตาก

หมู่ที่ 4 บ้านบ้านกงตาก ตำบลช้างซ้าย อำเภอกาญจนดิษฐ์ สุราษฎร์ธานี 84160

Mon - Fri: 9:00 - 17:30

077-400267

เฮเทอโรดูเพล็กซ์ อธิบายเกี่ยวกับการวิเคราะห์แบบเฮเทอโรดูเพล็กซ์

เฮเทอโรดูเพล็กซ์ วิธีการวิเคราะห์เฮเทอโรดูเพล็กซ์ HA ถูกเสนอโดยออฟเนอร์ในปี 2544 ซึ่งช่วยให้สามารถระบุการกลายพันธุ์ที่แปลใน 1 สายของเมทริกซ์ดีเอ็นเอ และในสถานะเฮเทอโรไซกัส ในส่วนผสมที่ขยายพร้อมกับโฮโมดูเพล็กซ์ 2 ประเภท

ลำดับนิวคลีโอไทด์ปกติและกลายพันธุ์ มีเฮเทอโรดูเพล็กซ์ระหว่างสายโซ่ดีเอ็นเอปกติและกลายพันธุ์ เฮเทอโรดูเพล็กซ์กลายพันธุ์มีความคล่องตัว ที่แตกต่างจากโฮโมดูเพล็กซ์ เนื่องจากลักษณะโครงสร้างที่ไซต์ ของนิวคลีโอไทด์ไม่ตรงกัน

ซึ่งตรวจพบโดยโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟเรซิส ความละเอียดของวิธีในการศึกษาชิ้นส่วนน้อยกว่า 300 bp ประมาณ 80 ถึง 95 เปอร์เซ็นต์ มีวิธีแก้ไขในเวอร์ชันต่างๆ เช่น เสริมด้วยเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส

ที่ไวต่อโครงสร้างร่วมกับสีย้อมเรืองแสงวิธี CSGE ใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อค้นหาการกลายพันธุ์ในยีนต่างๆ วิธีโครมาโตกราฟีของเหลว วิธี DNPLC ความแตกแยกทางเคมีของไซต์ที่ไม่เสริม กรอมเป้เสนอวิธีการแยกทางเคมีของไซต์ที่ไม่เสริมหรือวิธี SMS ในปี 1993

เนื้อหาข้อมูลคือ 95 ถึง 100 เปอร์เซ็นต์ วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับความสามารถของสารประกอบทางเคมี หรือเอนไซม์จำนวนหนึ่งเพื่อทำลายสายดีเอ็นเอ โดยเฉพาะที่ตำแหน่งของเบสที่ไม่มีการจับคู่ โดยเฉพาะอย่างยิ่งไซโตซีนที่ไม่จับคู่มีความไวสูงต่อไฮดรอกซีลามีน

และไทมีนที่ไม่จับคู่กับออสเมียมเตทรอกไซด์ การบำบัดภายหลังของโมเลกุลดีเอ็นเอดังกล่าว ด้วยพิเพอริดีนนำไปสู่การแตกแยกอย่างสมบูรณ์ที่ไซต์ที่ดัดแปลง สาระสำคัญของวิธี SMS คือการตรวจจับการกลายพันธุ์

โดยใช้หัววัดดีเอ็นเอที่ติดฉลาก ซึ่งสอดคล้องกับตัวแปรปกติของโมเลกุลดีเอ็นเอ โพรบดังกล่าวถูกสังเคราะห์โอลิโกนิวคลีโอไทด์ โคลนส่วนดีเอ็นเอหรือชิ้นส่วนขยาย เมื่อใช้วิธีนี้การอ้างอิงดีเอ็นเอที่มีป้ายกำกับจะผสมกับดีเอ็นเอหรือ RNA ที่ทดสอบมากเกินไป

ตัวอย่างดีเอ็นเอที่ทดสอบรวมถึงดีเอ็นเอโคลน ที่ได้รับการบำบัดด้วยเอนโดนิวคลีเอสที่เหมาะสมหรือชิ้นส่วนขยาย ส่วนผสมจะถูกทำให้ร้อนจนกระทั่งโมเลกุลเกลียวคู่ เกิดการเสียสภาพสมบูรณ์ จากนั้นทำให้เย็นลง

เพื่อสร้างเงื่อนไขสำหรับการก่อตัวของดูเพล็กซ์ เมื่อมีการกลายพันธุ์ในตัวอย่างดีเอ็นเอที่ทดสอบแล้ว ในเฮเทอโรดูเพล็กซ์ซึ่งเป็นผลมาจากการผสมพันธุ์ ระหว่างโมเลกุลสายเดี่ยวของตัวอย่างอ้างอิงกับดีเอ็นเอที่ทดสอบ

ตำแหน่งของการจับคู่ที่ไม่ใช่โฮโมโลกัสจะก่อตัวขึ้น หลังจากการบำบัดด้วยสารเคมีที่เหมาะสม โดยใช้อิเล็กโตรโฟรีซิสและการถ่ายภาพด้วยรังสีอัตโนมัติ การระบุและระบุตำแหน่งของการกลายพันธุ์ ในบริเวณดีเอ็นเอที่ศึกษาจะดำเนินการ

การปรากฏตัวของชิ้นส่วนดีเอ็นเอ ที่ถูกตัดทอนบนอิเล็กโทรโฟเรแกรมบ่งชี้ว่า มีตำแหน่งที่กลายพันธุ์ และการกำหนดขนาดของชิ้นส่วนที่ถูกตัดออก จะเผยให้เห็นตำแหน่งของตำแหน่งนี้ ในโมเลกุลดีเอ็นเอที่ทดสอบ

ข้อดีที่สำคัญของวิธี SMS คือ ความสามารถในการสำรวจดีเอ็นเอที่ยืดยาวมากถึง 2,000 bp ความสามารถในการตรวจหา การกลายพันธุ์หลายรายการพร้อมกันในชิ้นส่วนดีเอ็นเอเดียว ความสามารถในการใช้โพรบดีเอ็นเอหลายตัว เพื่อค้นหาการกลายพันธุ์

วิธีการแบบมัลติเพล็กซ์ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมามีการใช้วิธีการเรืองแสงในรูปแบบนี้อย่างกว้างขวาง เพื่อระบุการแทนที่ของนิวคลีโอไทด์แบบจุด การระบุการกลายพันธุ์และความหลากหลายทางพันธุกรรม

โครมาโตกราฟีของเหลวแบบแยกส่วนประสิทธิภาพสูง โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีความละเอียดสูง DNPLC ถูกเสนอโดย PJ ออฟเนอร์และ PA อันเดอร์บิลในปี 1995 ช่วยให้สามารถระบุการแทนที่นิวคลีโอไทด์เดี่ยว การลบและการแทรกในพื้นที่ขยายที่มีขนาดถึง 1.5 พัน bp

ภายใน 2 ถึง 3 นาที เนื้อหาข้อมูลของวิธีการถึง 95 เปอร์เซ็นต์ เมธอดนี้เป็นเวอร์ชันดัดแปลงของเฮเทอโรดูเพล็กซ์ ตามวิธีการนี้ ผลิตภัณฑ์ PCR ของชิ้นส่วน เฮเทอโรดูเพล็กซ์ ที่ศึกษา จะถูกทำให้เสียสภาพบางส่วนในสารละลาย

ที่มีตัวอย่างควบคุมของเอนไซม์เดียวกันในอัตราส่วน 11 โดยการให้ความร้อนแก่ส่วนผสมที่อุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียส และเปลี่ยนสภาพตามธรรมชาติอย่างช้าๆ ในกรณีที่ไม่มีการกลายพันธุ์ในส่วนที่ศึกษา จะมีการสร้างโฮโมดูเพล็กซ์เพียงประเภทเดียว

ในขณะที่มีการกลายพันธุ์จะมีการสร้างเฮเทอโรดูเพล็กซ์ และโฮโมดูเพล็กซ์หลายประเภท เฮเทอโรดูเพล็กซ์ที่ได้จะมีอุณหภูมิคงที่ น้อยกว่าโฮโมดูเพล็กซ์อย่างมีนัยสำคัญ เป็นคุณสมบัตินี้ที่ถูกจับโดยโครมาโตกราฟีแบบของเหลว

การเลือกอุณหภูมิหลอมเหลวเบื้องต้นของโฮโม และเฮเทอโรดูเพล็กซ์จะเพิ่มความไว ของวิธีนี้อย่างรวดเร็วเมื่อเทียบกับวิธี SSCP วิธีการสแกนยีนสองมิติ และการวิเคราะห์เฮเทอโรดูเพล็กซ์เอง วิธี DNPLC ใช้กันอย่างแพร่หลาย

เฮเทอโรดูเพล็กซ์

ในการกำหนดจีโนไทด์โดยการหาการแทนที่ นิวคลีโอไทด์เดี่ยว SNP และ EST เช่นเดียวกับในการวิเคราะห์เบื้องต้น ของการกลายพันธุ์ในยีนที่เป็นตัวเลือก การศึกษาเครื่องหมายโมเลกุลและ Y การกลายพันธุ์ของโครโมโซม

และโดยทั่วไปในการทำแผนที่ยีน พื้นผิวพลาสมาเรโซแนนซ์ วิธีเรโซแนนซ์พลาสมอนพื้นผิว วิธี SPR ขึ้นอยู่กับปรากฏการณ์ที่มีชื่อเดียวกัน ซึ่งเป็นปรากฏการณ์ควอนตัมออปติก ออปโตอิเล็กทรอนิกส์ที่เกิดจากการทำงานร่วมกัน

ระหว่างแสงโพลาไรซ์ที่มีความยาวคลื่นหนึ่งกับพื้นผิวโลหะ วิธีการ SPR ช่วยให้คุณตรวจจับโมเลกุลดีเอ็นเอ และควบคุมกระบวนการจับตัวกันระหว่างโมเลกุลตั้งแต่ 2 โมเลกุลขึ้นไปได้แบบเรียลไทม์ การทำงานร่วมกันของชิ้นส่วนดีเอ็นเอ

นำไปสู่การเปลี่ยนแปลงของดัชนี การหักเหของแสงในชั้นผิวของเซนเซอร์ที่ไวต่อแสง ซึ่งบันทึกเป็นการเปลี่ยนแปลงความเข้มของสัญญาณ SPR ในกรณีนี้โมเลกุลที่มีปฏิสัมพันธ์ตัวใดตัวหนึ่ง จะสะท้อนให้เห็นในเซนเซอร์ตามเวลาจริง

เมื่อเริ่มใส่ตัวอย่างแล้ว ตัวอย่างจะจับกับโอลิโกนิวคลีโอไทด์ ที่ตรึงบนพื้นผิวของเซนเซอร์ที่ไว ซึ่งช่วยเพิ่มสัญญาณ SPR ในตอนท้ายของขั้นตอนการฉีดของตัวอย่าง การเปลี่ยนแปลงตัวอย่างภายใต้กระแสบัฟเฟอร์ที่ต่อเนื่อง

และการลดลงที่สังเกตได้ในสัญญาณ SPR สะท้อนถึงการแตกตัวของตัวอย่าง จากสารเชิงซ้อนที่จับกับพื้นผิว ขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของนิวคลีโอไทด์ของโมเลกุลดีเอ็นเอที่ศึกษา ลักษณะของการเชื่อมโยงและการแยกตัวจะเปลี่ยนไป

ชิปดีเอ็นเอ ความก้าวหน้าที่สำคัญในการระบุ และการสแกนจำนวนมากของการแทนที่นิวคลีโอไทด์เดี่ยว SNPs โดยใช้วิธีชิปดีเอ็นเอ ชิปป็นชุดของลำดับโอลิโกนิวคลีโอไทด์สั้นๆ ที่มีองค์ประกอบแตกต่างกันและถูกตรึง

ด้วยวิธีทางเคมีบนกระจกในลักษณะที่วางได้ถึง 1,000 ชิ้นต่อ 1 ตารางเซนติเมตร ในขณะเดียวกันตำแหน่งของแต่ละชิปได้รับการแก้ไขอย่างชัดเจน และสามารถกำหนดได้โดยอัตโนมัติ ปัจจุบันมีชิป 3 ประเภทที่ใช้อยู่

ชิปไฮบริดพวกมันได้รับการพัฒนาบนพื้นฐาน ของการผสมพันธุ์เฉพาะของอัลลีล นี่คือลำดับโอลิโกนิวคลีโอไทด์ เอนทิตีที่ประกอบกันเป็นอัลลีลที่แตกต่างกัน 2 อัลลีล SNPs จะได้รับการแก้ไขบนสไลด์ ผลิตภัณฑ์ PCR

เรืองแสงที่มี SNPs จะถูกไฮบริไดซ์บนชิป และรูปแบบไฮบริไดเซชันที่ได้จะถูกวิเคราะห์ ภายใต้กล้องจุลทรรศน์หรือใช้โปรแกรมคอมพิวเตอร์พิเศษ ชิปที่มีการตรึงโอลิโกนิวคลีโอไทด์บนอะกาโรสเมทริกซ์

บทความที่น่าสนใจ : กรด อธิบายเกี่ยวกับความสัมพันธ์ของกรดอะมิโนในระดับสูง